Hur man rengör och regenererar kolonnen efter kontaminering?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: När en kromatografisk kolonn är förorenad kommer dess kromatografiska beteende att vara något annorlunda än en oförorenad kolonn. Kontaminerade kolonner kan orsaka mottrycksproblem. Den kontaminerade omvändfaskolonnen måste rengöras och regenerer......

När en kromatografisk kolonn är förorenad kommer dess kromatografiska beteende att vara något annorlunda än en oförorenad kolonn. Kontaminerade kolonner kan orsaka mottrycksproblem. Den kontaminerade omvändfaskolonnen måste rengöras och regenereras för att återställa de ursprungliga driftsförhållandena.
Nyckeln till att regenerera en förorenad HPLC-kolonn är att känna till föroreningens natur och hitta ett lämpligt lösningsmedel för att avlägsna den. Om kontamineringen orsakas av ackumulering av starkt kvarhållna ämnen under upprepade injektioner, kan enkla steg för att avlägsna dessa föroreningar ofta återställa det kromatografiska beteendet. Ibland, efter många operationer, tvättas den kromatografiska kolonnen med 90-100 % lösningsmedel B (det starkare lösningsmedlet i omvändfassystemet med två lösningsmedel) i 20 volymer för att eliminera föroreningar. Till exempel kan icke-vattenhaltiga lösningsmedel såsom metanol, acetonitril och tetrahydrofuran användas för de kvarvarande lipiderna i kolonnen.

Generellt sett har alla rengöringsmetoder liknande former. De använda lösningsmedlen ökar med lösningsmedlets styrka. Ofta är det sista lösningsmedlet mycket hydrofobt (som etylacetat eller till och med kolväte) och kan användas för att lösa upp opolära ämnen som lipider och oljor. Vi måste se till att varje lösningsmedel i en serie lösningsmedel kan blandas med nästa lösningsmedel.
I slutet av rengöringsprocessen är det nödvändigt att återgå till det ursprungliga lösningsmedelssystemet med hjälp av ett medelstarkt blandbart lösningsmedel. Till exempel är isopropanol ett mycket bra lösningsmedel som ett mellansteg eftersom det är blandbart med n-hexan eller diklormetan och även med vattenfaslösningsmedel. Viskositeten för isopropanol är dock mycket hög, och en låg flödeshastighet måste säkerställas för att undvika för högt pumptryck. Vid spolning av den kromatografiska kolonnen är spolvätskan direkt ansluten till avfallsflaskan från utloppsänden av den kromatografiska kolonnen och kan inte rinna genom detektionscellen för att undvika kontaminering av detektionscellen.
Omvänd faskromatografikolonn använder inte buffertlösning, använd följande lösningsmedelsserie för att regenerera:
100 % metanol → 100 % acetonitril → 75 % acetonitril-25 % isopropanol → 100 % isopropanol → 100 % metylenklorid → 100 % n-hexan → 100 % metylenklorid → 100 % acetylenklorid → 100 % acetylentrionipropanol.
Omvänd faskromatografikolonn använder buffertlösning, använd följande lösningsmedelsserie för att regenerera:
vatten → acetonitril → kloroform (eller isopropanol) → acetonitril → vatten.