Summary: Efter att ett laboratorium fått en ny cellinje måste cellinjen först odlas och expanderas och sedan frysas. Kryokonservering av celler kan först och främst användas som backup när celler går förlorade på grund av föroreningar och andra f......
Efter att ett laboratorium fått en ny cellinje måste cellinjen först odlas och expanderas och sedan frysas. Kryokonservering av celler kan först och främst användas som backup när celler går förlorade på grund av föroreningar och andra förhållanden. Dessutom genomgår nästan alla celler en viss grad av variation under odlingsprocessen och passage. För att bibehålla konsistensen av experimentella resultat kan celler i allmänhet inte odlas i dussintals generationer. Om den används igen är det nödvändigt att tina och odla de kryokonserverade, mindre passage cellerna före användning.
Det finns fyra huvudpunkter i cellfrysningsprocessen: cellskörd, användning av skyddsmedel, fryshastighet och lagringsmiljö.
Cellskörd
Cellerna som används för kryokonservering väljs i allmänhet när cellerna är ungefär 90 % konfluenta. Vid denna tidpunkt är celltillväxten god och antalet celler är stort, och odlingsmediet bör bytas 24 timmar innan cellerna skördas. Metoden för att skörda cellerna för kryokonservering är densamma som vanligt. Centrifugera vid 100xg i 5 minuter för att samla upp cellerna och återsuspendera dem. De levande cellerna räknas. Späd eller koncentrera till två gånger den slutliga cellkoncentrationen för cellkonservering (vanligtvis 4-10 miljoner celler/ml), tillsätt en lika stor volym av odlingsmediets skyddsmedelsblandningslösning som har beretts och blanda försiktigt och alikvotera till kryokonserveringsröret, kryokonservering.
Användning av skyddsmedel.
Vid kryokonservering av celler används DMSO i allmänhet som ett skyddande medel. Vid kryokonservering av celler är den slutliga koncentrationen av DMSO som används i allmänhet 5-15 %. Koncentrationen av DMSO i kryokonserveringslösningen av en specifik cell kan hittas från ATCC. För särskilt känsliga celler, särskilt hybridomceller, kan det vara bättre att använda 95 % serum och 5 % DMSO vid kryokonservering. När du använder skyddsmedlet, använd odlingsmedium eller serum för att göra dubbelt så hög slutkoncentration, och blanda det sedan med en lika stor volym suspensionscellodlingsmedium. Cellfrysningshastighet
Fryshastigheten för celler kontrolleras bäst för att ge tillräckligt med tid för cellerna att dehydreras utan att skadas av överdriven uttorkning. För de flesta celler är ett temperaturfall på 1 till 3°C per minut lämpligt. Den vanliga operationen är att placera cellerna vid -20°C i 1-2 timmar och sedan lägga dem i -80°C kylen över natten (om det inte finns något -80°C kylskåp kan du använda torris istället), och överför sedan till tanken för flytande kväve eller under -130 Långtidsförvaring i kylskåp vid ℃.
Förvaringsmiljö
Långtidslagringstemperaturen för celler är -130 ℃ eller lägre. Temperaturen på det gasformiga skiktet i tanken med flytande kväve är mellan -140 ℃ och -180 ℃. Celler kan lagras i det gasformiga skiktet eller nedsänkas i flytande kväve. Om möjligt är det bäst att förvara i det gasformiga lagret, eftersom det kan undvika att flytande kväve kommer in i fryslagret. Röret orsakar en explosion när cellerna tas ut (men på detta sätt kan endast en liten mängd flytande kväve lagras i tanken med flytande kväve, som behöver tillsättas ofta). Cellerna kan också förvaras i kylen vid -80℃ i några månader eller så.
英语
阿拉伯语
���ļ���