Hur väljer man rätt kolumn?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Kromatografisk kolonnpackningsmatris A. Silikagelmatris: hög renhet, låg kostnad, hög hållfasthet, enkel kemisk modifiering, men pH-intervallet är begränsat. De flesta kiselmatrisfyllmedel är stabila mellan pH 2-8, men den speciellt modifier......

① Kromatografisk kolonnpackningsmatris
A. Silikagelmatris: hög renhet, låg kostnad, hög hållfasthet, enkel kemisk modifiering, men pH-intervallet är begränsat. De flesta kiselmatrisfyllmedel är stabila mellan pH 2-8, men den speciellt modifierade kiselgelbundna fasen kan stabiliseras vid pH 1,5-10.
B. Polymermatris: brett applikations-pH-område, stabil temperatur (hög temperatur kan nå över 80 grader) och låg mekanisk hållfasthet.
②Partikelform
De flesta moderna HPLC-fyllmedel är sfäriska partiklar, men ibland oregelbundna partiklar. Sfäriska partiklar ger lägre kolonntryck, högre kolonneffektivitet och stabilitet och längre kolonnlivslängd. Vid användning av en högviskös aktiv fas; oregelbundna partiklar har en större specifik yta och ett relativt lågt pris.
③Partikelstorlek
Ju mindre partikelstorlek, desto högre effektivitet och högre upplösning, men samtidigt kommer det att leda till ett högre kolonntryckfall. Välj 1,5-3μm packningsmaterial för att lösa några komplexa prover, UPLC kan använda 1,5μm packning; ytterligare 10 μm eller större partikelstorlekspackning används som semi-preparativ eller preparativ kolonn.
④Kolhalt
Kolhalten i en kromatografisk kolonn hänvisar till förhållandet mellan den bundna fasen på ytan av silikagelen, vilket är relaterat till den specifika ytan och bindningstäckningen. Högt kolinnehåll förbättrar kolumnkapacitet, upplösning och analystid och används för komplexa prover som kräver hög upplösning; låg kolhalt har kort analystid och uppvisar olika selektivitet och används för snabb analys av enkla prover och högvattenhaltiga aktiva faser. Skickprover. I allmänhet varierar kolhalten i C18 från 7-19%.
⑤ Porstorlek och specifik yta
HPLC-adsorptionsmedium är porösa partiklar och det mesta av reaktionsytan finns i porerna. Därför måste molekyler komma in i porerna för att adsorberas och separeras.
Kromatografisk kolonnporstorlek och specifik yta är två komplementära begrepp. Porstorleken är liten och den specifika ytan är stor, och vice versa. Stor specifik yta, ökar reaktionen mellan provet och den bundna fasen, ökar lagring, provladdning och separation av komplexa komponenter; liten specifik yta, snabb jämviktstid, lämplig för gradientanalys.
⑥ Porvolym och mekanisk styrka
porvolym, även känd som "porvolym". Avser storleken på tomrumsvolymen per partikel. Det kan väl återspegla fyllmedlets mekaniska styrka. Fyllmedel med stor porvolym har något svagare mekanisk hållfasthet än de med liten porvolym. Fyllmedel med en porvolym på 1,5 ml/g eller mindre används mest för HPLC-separation, medan fyllmedel med en porvolym större än 1,5 ml/g används för storleksexklusionskromatografi och lågtryckskromatografi.
⑦ ändkåpa
Kolonnändtäckning kan minska svanstopparna för polära basiska föreningar på grund av interaktionen med exponerade silanolgrupper. Den oblockerade bundna fasen kommer att ha olika selektivitet jämfört med den blockerade bundna fasen, speciellt för polära prover.